Ultrastructural immunocytochemistry of a Leydig cell enzime and sperm tail protein using antigen retrieval by microwave irradiation Autores/as Mariana P. Musse Héctor E. Chemes Resumen Presentem aquí un protocol simple i ràpid per a la localització de diversos antígens en mostres biològiques incloses en resines acríliques per electromicroscòpia i immunoprecipitació amb or. S'han utilitzat cèll. ules de Leydig de rates adultes separades per gradients de densitat i espermatozoides humans per estudiar la localització subcell. ular d'antígens específics i analitzar la influència de l'exposició a la irradiació per microones sobre la immunoreactivitat valorada per marcatge d'or immunoprecipitat sobre material fixat per formaldehid i inclòs en LR White. Es varen utilitzar seccions ultrafines muntades sobre suports de níquel i immerses en tampó citrat, exposant-les a la irradiació per microones (a màxima potència: 800 W) durant breus períodes de temps. La microscòpia immunoelectrònica es va fer utilitzant anticossos primaris contra l'enzim esteroidogènic (3-beta-hidroxiesteroid-deshidrogenasa, 3-beta-HSD) del reticle endoplasmàtic llis i una proteïna del citosquelet de l'embolcall fibrós de l'espermatozoide (AKAP4). L'anticòs secundari utilitzat fou una immunoglobulina anticonill conjugada amb or (partícules de 15 nm). Les seccions control es varen incubar en sèrum no immune. Les seccions varen ser breument exposades a tetraòxid d'osmi i a acetat d'uranil o foren analitzades, senzillament, sense cap tipus de tinció. El marcatge es va expressar per densitat de partícules d'or per µm2. El soroll de fons fou negligible. La localització de la 3-beta-HSD fou específica en el reticle endoplasmàtic llis de les cèll. ules de Leydig, mentre que els mitocondris i les gotes lipídiques foren negatives. La proteïna AKAP4, principal component de l'embolcall fibrós de la cua de l'espermatozoide i clàssicament localitzada en les fibres d'aquest embolcall fibrós, i en altres components de la cua de l'espermatozoide, varen ser negatius. Després de l'exposició de les seccions a les microones, la densitat de partícules d'or en el reticle endoplasmàtic llis de les cèll. ules de Leydig i en l'embolcall fibrós dels espermatozoides havia augmentat tres vegades en relació amb els mateixos teixits no exposats a les microones, sense comprometre la localització específica de la immunotinció. Aquest mètode permet un augment significatiu de la sensibilitat i de la densitat del marcatge sense modificar les concentracions d'anticòs, l'especificitat o la tinció no específica o de soroll de fons. Descargas Los datos de descargas todavía no están disponibles. Descargas Text complet (Català) Publicado 2007-12-28 Número 56, 2005 : Endocrinologia molecular / Jaume Reventós editor Sección Articles Licencia La propietat intel·lectual dels articles és dels respectius autors. En el moment de lliurar els articles a Treballs de la Societat Catalana de Biologia per sol·licitar-ne la publicació, els autors accepten els termes següents: — Els autors cedeixen a la Societat Catalana de Biologia (filial de l’Institut d’Estudis Catalans) els drets de reproducció, comunicació pública (incloent-hi la comunicació a través de les xarxes socials) i distribució dels articles presentats per a ser publicats a Treballs de la Societat Catalana de Biologia, en qualsevol forma i suport, i per qualsevol mitjà, incloses les plataformes digitals. El Comitè Editorial es reserva els drets d’acceptar o de refusar els treballs presentats i, igualment, es reserva el dret de fer qualsevol modificació editorial que consideri convenient. De ser acceptada pels autors, aquests hauran de lliurar l’article amb els canvis suggerits. — Els autors responen davant la Societat Catalana de Biologia de l’autoria i l’originalitat dels articles presentats. És a dir, els autors garanteixen que els articles lliurats no contenen fragments d’obres d’altres autors, ni fragments de treballs propis publicats anteriorment; que el contingut dels articles és inèdit, i que no s’infringeixen els drets d’autor de tercers. Els autors accepten aquesta responsabilitat i s’obliguen a deixar indemne la Societat Catalana de Biologia de qualsevol dany i perjudici originats per l’incompliment de la seva obligació. Així mateix, han de deixar constància en els articles que enviïn a la revista de les responsabilitats derivades del contingut dels articles. — És responsabilitat dels autors obtenir els permisos per a la reproducció sense restriccions de tot el material gràfic inclòs en els articles, així com garantir que les imatges i els vídeos, etc., han estat realitzats amb el consentiment de les persones que hi apareixen, i que el material que pertany a tercers està clarament identificat i reconegut dins del text. Així mateix, els autors han d’entregar els consentiments i les autoritzacions corresponents a la Societat Catalana de Biologia en lliurar els articles. — La Societat Catalana de Biologia està exempta de tota responsabilitat derivada de l’eventual vulneració de drets de propietat intel·lectual per part dels autors. En tot cas, es compromet a publicar les correccions, els aclariments, les retraccions i les disculpes si escau. — Els continguts publicats a la revista estan subjectes —llevat que s’indiqui el contrari en el text o en el material gràfic— a una llicència Reconeixement - No comercial - Sense obres derivades 3.0 Espanya (by-nc-nd) de Creative Commons, el text complet de la qual es pot consultar a https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/es/deed.ca. Així doncs, s’autoritza el públic en general a reproduir, distribuir i comunicar l’obra sempre que se’n reconegui l’autoria i l’entitat que la publica i no se’n faci un ús comercial ni cap obra derivada. — La revista no es fa responsable de les idees i opinions exposades pels autors dels articles publicats.
